Меню Рубрики

Что такое вирусная нагрузка на печень пцр в

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это лабораторный метод определения ДНК и РНК. Впервые он был опробован почти полвека назад американцем Кэри Муллисом. Этот сверхчувствительный анализ способен определить носителя генома по одной исходной молекуле, содержащейся в крови, слюне или коже.

Метод ПЦР имеет огромные перспективы, находит применение не только в медицине, но и в генной инженерии, и в криминалистике. С его помощью клонируют и создают новые виды ДНК, определяют степень родства. По кусочку эпителия, найденного на месте преступления, устанавливают преступника.

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Специальный препарат, основанный, на натуральных веществах

Первые результаты чувствуются уже через неделю приема

Всего 1 раз в день, по 3 капли

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

  • Генотип 1а, 1b, 1с
  • Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
  • Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
  • Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
  • Генотип 5 а
  • Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

  • правил хранения реактивов;
  • соответствующей квалификации медперсонала;
  • чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

  • уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
  • определяется эффективность противовирусного лечения;
  • выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

  • низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
  • средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
  • высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

  • общая слабость;
  • изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
  • тошнота;
  • снижение аппетита;
  • боли в мышцах и суставах;
  • тяжесть в правом подреберье;
  • повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

  1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
  2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
  3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
  4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
  5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

  • для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
  • высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

источник

Современная диагностика гепатитов требует не только выявления причины, но и определения стадии болезни, интенсивности поражения печени. Это необходимо для выбора оптимального варианта лечения, прогноза жизни пациента.

Вирусная нагрузка при гепатите С — один из наиболее информативных способов решения проблемы и ответа на вопросы врача. Он основан на качественном и количественном анализе состава рибонуклеиновых кислот (РНК) вируса в крови больного человека. По полученным показателям можно с достоверностью судить о скорости прогрессирования патологии печени.

Диагностика вирусного гепатита С проводится по специальным чувствительным тестам. Качественный анализ подтверждает или отрицает наличие вируса в клетках крови больного. Результат дается в форме (+) или (-), «да» или «нет». Указывает на заболевание даже в ранней стадии, но не дает возможности установить интенсивность развития поражения печени, «силу» вируса.

Для проведения достаточно специального экспресс-теста и капли крови. Он позволяет обнаружить антитела к вирусу. Можно приобрести в аптеке. Состоит из комплекта пластиковой полоски, пипетки и игольчатого приспособления для прокола пальца. Кровь забирается пипеткой и помещается в указанный отсек.

Результат получают спустя 10–15 минут. Появление двух полосок говорит «да», одной — «нет». Бывает видно еще одно слабо окрашенное пятно. Его можно расценить, как низкую концентрацию антител.
После получения положительного ответа пациент должен обязательно проходить обследование для точного установления диагноза.

Качественные нарушения в организме при гепатите С подтверждаются клинико-биохимическими исследованиями. О высокой степени поражения печеночных клеток и нарушенных функциях органа говорят следующие результаты:

  • рост СОЭ, гемоглобина;
  • обнаружение уробилина и билирубина в моче;
  • увеличенные в разы трансферазы (аланиновая и аспарагиновая);
  • снижение протромбинового индекса и альбуминов;
  • рост фруктозо-1-фосфатальдолазы Ф-1-ФА, тимоловой пробы; значительное повышение в сыворотке холестерина, триглицеридов, билирубина.

Подтверждением нарушенных функций печени являются ферменты:

  • щелочная фосфатаза;
  • сорбитдегидрогеназа;
  • лактатдегидрогиназа;
  • гаммаглутаминтранспептидаза;
  • гаммаглутамилтрансфераза.

Их изучают в биохимических лабораториях поликлиники. Резкое отклонение состава требуют дополнительных количественных анализов на вирусную нагрузку.

Вирус гепатита С в отличие от других имеет множество штаммов (генотипов). Выделено более 9 разновидностей, кроме того, каждый еще подразделяется на 3–4 подтипа. Это предоставляет вирусу возможность мутировать.

Весь генетический материал заключен в РНК и находится в ядерных структурах клетки микроорганизма. Количественный метод используется при выявленном бесспорном диагнозе, когда необходимо установить форму болезни и стадию воспалительного процесса.

Подсчет производится по числу клеток вируса в 1 мл крови пациента. Чем больше РНК вируса гепатита С, тем выше активность поражения. Это указывает на угрозу прогрессирования болезни, распространения на здоровые клетки печени. Если численность клеток ненамного выше нормы, то результат все равно считается вирусной нагрузкой.

Для определения количества РНК в «больных» клетках применяют иммунологические методы. Они заключаются в выявлении специфических антител или, наоборот, антигенов при воздействии известным реактивом.

В методике иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотку пациента вводят стандартные антитела, меченные ферментами. Если в крови имеются антигенные структуры вируса гепатита С, то комплексы антиген+антитело изменяют цвет красящего вещества. Количественный подсчет основан на пропорциональном соответствии молекул антигена.

Способ иммуноблоттинга — более чувствителен, сочетает ИФА и предварительное разделение плазмы электрофорезом. Позволяет выявить маркеры гепатита С (антитела и иммуноглобулины). Для исследования используют РНК-блоттинг, белок-блоттинг. Время проведения анализа от трех часов до двух суток.

Радиоиммунологический анализ (РИА) — отличается использованием меченых изотопов для количественной оценки компонентов реакции. Последующая радиометрия выдает окончательную цифру. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — не является иммунологическим. Его значимость трудно переоценить.

Дело в том, что даже при крайне малом содержании специфической генной информации из РНК проводится репликация (копирование) цепи аминокислот, что увеличивает общую массу субстрата. Поэтому исследование генома считается наиболее достоверным. Показывает положительный результат при заражении уже на пятый день, задолго до проявления клинической симптоматики. У здорового человека результат будет отрицательным.

Одна из рекомендаций ВОЗ — троекратное исследование методом ПЦР для выявления РНК вируса гепатита С. Анализ называется «тест 321».

Эксперты сделали вывод, что только троекратное подтверждение вирусной нагрузки не менее 60 МЕ/мл считается достоверным диагностическим признаком даже на фоне отсутствия других маркеров.

Обычно кровь на ПЦР во время гепатита С сдают в первый раз до лечения, затем после первой, четвертой, двенадцатой и двадцать четвертой недели. Исследование после трех месяцев лечения (12 недель) считается показателем эффективности применяемых препаратов.

Метод раздвоенной ДНК(R-DNK). Считается более дешевым, но менее результативным. Подходит для государственных медицинских учреждений. Позволяет проводить исследование сразу больших коллективов людей. Способен выдать негативный результат при наличии вируса. Более рационально этот метод рекомендуется использовать в качестве дополнительного обследования.

Читайте также:  Дрожжевое тесто для пирожков с картошкой и печенью

Способ транскрипционной амплификации (ТМА). Наиболее простой и дешевый при достаточной эффективности. Подходит для диагностики гепатита С. Критерием патологии и степень заразности больного при R-DNK считается уровень выше 500 ME, при TMA — от 5 до 10 ME.

Чем больше содержание вируса в крови человека, тем он опаснее для окружающих своей заразностью. Эффективность лечения зависит от того, как удается снизить количество вируса. Этот критерий учитывается для прогноза выздоровления.

Содержание возбудителя проверяют в динамике. Если удается уменьшить вирусную нагрузку, то медикаменты считаются эффективными, можно переводить больного на поддерживающие дозировки. При отрицательной динамике анализа необходима корректировка дозы или замена препаратов. Общую оценку состояния пациента дает одновременное сопоставление с результатами клинических и биохимических тестов.

Для первого исследования необходим недельный срок. Динамика повторных анализов проводится спустя месяц. При положительном анализе на антитела у людей без симптомов болезни необходимо повторять исследование вирусной нагрузки ежегодно.

По итогам выдаются общие качественные результаты (отрицательный или положительный). При выявлении вируса подробно указывается количественное значение с характеристикой степени зараженности.

Расшифровка вирусной нагрузки при гепатите С проводится в международных единицах (МЕ/мл):

  • высоким считается показатель — свыше 800 000 МЕ/мл;
  • низкой вирусной нагрузкой — меньше 800 000.

Одновременно учитывается в первом случае более 2 млн копий/мл, во втором — менее. При высокой нагрузке говорят об активном воспалительном процессе. В таблице указана более подробная трактовка степени нагрузки.

Степень Вирусная нагрузка в МЕ/мл крови
низкая от 600 до 30000
средняя от 30000 до 800000
высокая свыше 800000

Наиболее частое значение при первичном исследовании на фоне признаков гепатита — примерно 1 100 000 МЕ/мл. Результат считается положительным. Назначается весь комплекс терапии. Если обнаруживают от 400 000 ME и более, считается что вирус не просто присутствует, но и активно размножается, заражая окружающих. Небольшое снижение — показатель благоприятного прогноза на выздоровление.

Отрицательный результат и эффективное лечение подтверждаются полным отсутствием генного материала РНК вируса гепатита С в крови. Его считают достоверным при повторах с большими перерывами. Увеличение вирусной нагрузки после окончания курса лечения и хороших показателей указывает на вероятность рецидива гепатита.

Если в заключении написано: «РНК ниже диапазона измерений», это значит, что генетический материал вируса имеется, но слишком мал для определения конкретного количества данным методом. Подтвердить анализ или опровергнуть можно только с помощью способа полимеразной цепной реакции.

При выявлении положительного анализа на гепатит С у беременной женщины с повышенной вирусной нагрузкой значительно повышается риск заражения плода от больной матери. Приходится решать вопрос о целесообразности сохранения беременности, поскольку применение лекарственных препаратов для лечения может вызвать тяжелые генные мутации у ребенка.

источник

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Различают три вида ПЦР-анализа:

    Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

  • Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.
  • ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

    • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
    • положительный результат иммуноферментного анализа;
    • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
    • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
    • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
    • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
    • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
    • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
    • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

    Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

    В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

    Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

    Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

    Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

    Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

    Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

    Обнаружена РНК определенного генотипа

    В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

    Обнаружена РНК вируса гепатита С

    В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

    Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

    Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

    Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

    • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
    • образец биоматериала был загрязнен;
    • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
    • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

      Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

    Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

  • Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.
  • Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

    Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

    • анализ крови сдают с утра;
    • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
    • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
    • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

    источник

    Подозрение на HCV-инфекцию является показанием для прохождения большого количества различных инвазивных и неинвазивных исследований. Вирусная нагрузка при гепатите С – один из основных показателей, определяющих прогноз течения заболевания и схему лечения.

    HCV отличается гемоконтактным механизмом передачи возбудителя. Вирус передается с кровью и другими биологическими жидкостями. При этом обязательными условиями служат повреждения эпидермального покрова и/или слизистых оболочек.

    Механизм заражения связан с искусственными (медицинские и немедицинские манипуляции) и естественными (вертикальный от матери к ребенку, половой и контактно-бытовой) путями передачи. Но в последние году существенно снизилась частота заражения гепатитом С при процедурах, проводимых в условиях государственных больниц и частных клиник.

    HCV-инфекция характеризуется полиморфизмом клинических проявлений. У многих пациентов болезнь протекает без каких-либо симптомов, частота хронизации достигает 83%. У 35% больных через несколько лет диагностирует цирроз, а у 40% – патология постепенно переходит в первичную гепатоцеллюлярную карциному.

    Ранее болезнь чаще диагностировали у относительно молодых людей 20–29 лет, в настоящее время средний возраст пациентов – 30–39 лет.

    Читайте также:  Баралгин в уколах влияет на печень

    К группе особенно высокого риска инфицирования относят:

    • лиц с пристрастием к наркотическим инъекционным препаратам;
    • медицинских работников и косметологов, постоянно контактирующих с кровью;
    • детей, родившихся от матерей, зараженных какой-либо формой гепатита С;
    • членов семей инфицированных;
    • пациентов стационаров, получающие множественные внутривенные манипуляции;
    • лиц, занимающиеся коммерческим сексом.

    С момента открытия в середине 1970-х годов HCV называли вирусным гепатитом ни-А, ни-В. В 1977 г. патология была включена в номенклатуру вирусных гепатитов. Применение новых молекулярных методик позволило в 1988 году выделить и клонировать геном HCV. В этом же году обнаружили два основных структурных белка NS3 и NS4. Впоследствии на их основе были созданы тест-системы, функционирующие по принципу радиоиммунного и иммуноферментного анализа. В 1990 году Э.Уайнер разработал метод качественной и количественной идентификации генома вируса в сыворотке крови на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР).

    Специалисты до сих пор не могут окончательно определить механизм повреждения и последующей гибели гепатоцитов. Некоторые придерживаются теории, что некроз клеток обусловлен репликацией вирусной инфекции, другие считают данный процесс следствием иммунного ответа на проникновение патогена. Вполне вероятно сочетание этих двух механизмов.

    До того, как РНК вируса возможно количественно выделить методом ПЦР, патоген в своем развитии проходит несколько этапов. Это:

    • прикрепление HCV к наружной мембране клетки печени;
    • проникновение вируса внутрь клетки (предполагают, что это происходит из-за связи липопротеинов клеточной оболочки и субъединицы Е2 HCV);
    • высвобождение РНК в цитоплазму клетки;
    • трансляция РНК, формирование репликативного комплекса и прикрепление его на внутреннюю поверхность клеточной мембраны;
    • синтез новых цепей РНК и патогенных белков, служащих основой для сборки вируса;
    • выход вириона из клетки и поражение соседних структур.

    Интенсивность этого процесса напрямую влияет на течение заболевания, вероятность сопутствующих поражений печени и их тяжесть, успех и прогноз противовирусной терапии.

    Процесс репликации РНК происходит непрерывно, и концентрация вирусных частиц в организме человека постоянно растет. Уровень копий HCV в крови (для удобства эту цифру обозначают в 1 мл) и называют вирусной нагрузкой (ВН). При правильном подборе лечения количество вируса гепатита С в крови постепенно снижается. Терапию считают удачной, если как в процессе приема определенных медикаментов, так и спустя полгода после его окончания вирусологическая (вирусная) нагрузка отрицательна , то есть РНК HCV в крови не обнаруживается.

    В соответствии с рекомендациями ВОЗ, начинают диагностику HCV с анализа методом ИФА. Иммуноферментный способ выявления вируса широко используется для определения времени инфицирования и фазы течения инфекции (острая, хроническая либо период обострения). Но из-за особенностей функционирования иммунной системы человека, на протяжении 3–6 месяцев наблюдают так называемое «серологическое окно» – время, когда антитела к HCV в крови не обнаруживаются.

    Полимеразная цепная реакция позволяет сократить этот срок как минимум вдвое. Методом ПЦР вирус в крови можно выявить гораздо раньше – при использовании современных высокочувствительных тест-систем через 2–3 недели с момента заражения.

    Определение показателей количества вирусной нагрузки проводят несколько раз. Первый анализ необходим перед началом терапии. С одной стороны, исследование служит косвенным подтверждением результатов предшествующей качественной ПЦР и ИФА. А с другой, позволяет врачу оценить тяжесть течения заболевания и степень риска развития внепеченочных и печеночных осложнений.

    Вирусную нагрузку определяют и в процессе терапии (на 28 день и по окончании). Контрольное исследование делают через 24 и 48 недель после приема последней таблетки противовирусного лекарственного средства. Для удобства расшифровки концентрацию РНК указывают в малом объеме крови – 1 мл. Вирусологическую нагрузку обозначают как МЕ либо число копий.

    Во избежание путаницы и неверной трактовки результатов исследований, обращают внимание на референсные значения, указанные в бланке анализа. Нормы для концентрации HCV, измеряемой в МЕ/мл и копий/мл существенно отличаются.

    В зависимости от общего количества вирионов, вирусологическая нагрузка бывает:

    • отрицательная, когда РНК HCV не обнаруживается;
    • низкая;
    • умеренная;
    • высокая.

    Какая вирусная нагрузка при гепатите С? На этот вопрос может ответить только врач в каждом конкретном случае. Можно предварительно обсудить результаты на специализированном форуме, однако окончательный вердикт выносит доктор. Данная характеристика необходима для определения точной тактики ведения пациента. При низкой или умеренной физической нагрузке прописывают стандартные протоколы лечения, при высокой показаны многокомпонентные медикаменты с обязательным контролем функции печени.

    Многие пациенты задают вопрос, как узнать вирусную нагрузку и посчитать точное количество копий HCV. Это возможно только при постановке ПЦР. Данная методика позволяет выявить РНК гепатита С в организме человека, точно оценить его концентрацию. Также ПЦР позволяет врачу установить генотип вируса, что также является одним из основных критериев подбора методики лечения.

    Анализ на вирусную нагрузку при гепатите С проводится в клинической лаборатории с использованием определенных тест-систем. Современные наборы отличаются не только специфичностью, но и высокой чувствительностью. Поэтому перед сдачей анализа (особенно при подозрении на раннее инфицирование либо при контроле эффективности лечения) необходимо поинтересоваться, какое оборудование применяют для оценки результатов.

    Перечень тест-систем с их характеристиками приведен в схеме:

    Как определить вирусную нагрузку при гепатите С? Для этого пациенту необходимо обратиться в государственную или частную лабораторию и сдать кровь на количественную ПЦР. Нередко анализ выполняют в комплексе с генотипированием (целесообразно проводить при первичной диагностике).

    Существует несколько методик проведения ПЦР, каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки.

    Их перечень приведен в таблице:

    Подобный способ количественного определения копий вируса используется в наборах Versant HCV RNA Qualitative Assay от Bayer Diagnostics. Характеризуется:

    • очень высокой чувствительностью – 50 копий/мл;
    • скоростью выполнения (для получения первых результатов требуется 30–40 минут)
    Название способа ПЦР Описание реакции
    Обратная транскрипция (ОТ)
    • одна из первых методик ПЦР, применяется с 1990 года;
    • наработка копий ДНК осуществляется при помощи ДНК-зависимой ДНК-полимеразы, полученной из определенного вида бактерий;
    • чувствительность метода невысока (от 100 МЕ/мл, но этот параметр можно повысить при помощи модификации ОТ ПЦР – «гнездового» (nested) способа постановки реакции
    Лигазная ПЦР Методика отличается высокой чувствительностью. По такому принципу «работает» тест-система Abbott Real Time
    Транскрипционно-опосредованная амплификация
    Метод гибридизации с использованием разветвленных зондов По такому принципу функционирует диагностическая система Versant HCV RNA 3.0, Bayer Diagnostics. Проводится в 96-луночных планшетах. Методика практически не применяется из-за низкой чувствительности (определяется от 2500 копий/мл). Однако в некоторых случаях исследование проводят для обнаружения вируса непосредственно в клетках печени

    Обычно доктора знают все характеристики применяемых в лабораториях тест-систем. Чувствительность используемых диагностических наборов важна не только для количественного, но и для качественного определения РНК HCV. Выявление даже незначительной концентрации гепатита С позволяет провести диагностику в кратчайшие сроки после инфицирования. Впоследствии высокочувствительные количественные тест-системы способствуют более эффективному контролю проводимого лечения.

    Количественный анализ содержания вируса в организме человека методом полимеразной цепной реакции не назначается в качестве первого диагностического теста. Причинами подобного поэтапного выявления гепатита С служит необходимость многократного подтверждения результатов.

    Показаниями к началу процесса определения HCV являются:

    • появление характерных для вирусной инфекции симптомов (слабости, нарушений пищеварения и т.д.);
    • отклонение от нормы в показателях печеночных проб;
    • профилактическая проверка (рекомендуют проводить ежегодно по собственному желанию или оформлении медицинских документов для работы).

    Основные стадии диагностики вирусного гепатита С, предшествующие назначению количественного определения РНК методом полимеразной цепной реакции представлена на схеме.

    Проведение исследования методом количественной ПЦР является обязательным условием контроля эффективности приема противовирусных медикаментов. Первый анализ сдают на 4 неделе лечения, затем на 12 и на 24 (если курс длится полгода). Повторно вирусную нагрузку проверяют через 12, затем через 24 и 48 недель после окончания терапии.

    Отсутствие копий вируса в образце крови при первом исследовании называют устойчивым вирусологическим ответом (сокращенно, УВО), что означает хороший ответ на терапию и благоприятный прогноз излечения. Концентрация РНК HCV, не определяемая количественной ПЦР при последнем анализе, свидетельствует о полной эрадикации вируса, после таких результатов (а также их повторной проверки), врач сообщает пациенту, что он здоров.

    Если определяется вирусная нагрузка при гепатите С, расшифровка полученных данных должна проводиться профильным специалистом (гепатологом или инфекционистом). По мнению докторов, процесс диагностики HCV напоминает логическую математическую цепочку: результат одного анализа служит основанием для определения типа последующего исследования.

    Пациенту следует как можно больше знать о собственном диагнозе, но не заниматься самолечением. Это необходимо для понимания важности и целесообразности терапии и предупреждения распространения инфекции на других людей.

    Примерная расшифровка результатов количественной ПЦР с указанием нормы и градации в зависимости от референсных показателей представлена в таблице:

    Показатели исследования Особенности расшифровки
    Копии РНК (RNA HCV) не обнаружены Человек здоров либо с момента заражения произошло недостаточно времени для репликации вируса в количестве, определяемом в ходе анализа
    800 МЕ/мл либо 200ˑ104 копий/мл или ниже Низкая степень ВН
    Выше 800 МЕ/мл или 20 000ˑ102 копий/мл Высокий уровень ВН

    Если РНК вируса в крови не обнаружены, человек скорее всего здоров. Однако ПЦР может определить HCV только спустя 2–3 недели, иногда – через 2–3 месяца после заражения. Поэтому при сомнительных результатах ИФА следует повторить исследование. Норма при постановке ПЦР на фоне противовирусной терапии или после ее окончания свидетельствует о ее эффективности.

    Достаточно опасный показатель. Свидетельствует о неблагоприятном течении вирусного гепатита С, высоком риске тяжелых осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы). Человек с высокой ВН опасен и для окружающих. Возрастает риск заражения при половых контактах, поцелуях и контактно-бытовыми способами. При подобных результатах доктор часто назначает пролонгированный курс терапии (на 24 недели), дополняет его различными препаратами.

    Низкая вирусная нагрузка – признак или недавнего заражения, или латентного течения инфекции. Риск передачи заболевания невысок, за исключением прямого гемоконтакта. Прогноз терапии благоприятен при соблюдении рекомендаций врача и отсутствии тяжелых поражений клеток печени.

    Только у 15–17% пациентов наступает самостоятельное излечение острой формы вируса без медикаментозной терапии. Но в подавляющем большинстве случаев болезнь переходит в хроническое течение, что требует приема определенных лекарственных препаратов.

    Обычно доктора назначают:

    • Даклатасвир;
    • Софосбувир;
    • Ледипасвир;
    • Асунапревир и др.

    Медикаментозное лечение – единственный способ быстро снизить ВН и полностью избавиться от патологии.

    Но наравне с приемом предписанных врачом медикаментов необходимо соблюдение диеты с исключением вредных для печени блюд и продуктов. Категорически противопоказан алкоголь. Рекомендуют отказаться от пристрастия к никотину. Также терапия может не оказать должного результата при употреблении наркотиков.

    Разнообразные народные средства, рецепты нетрадиционной медицины на основе трав, продуктов пчеловодства и т.д. могут применяться лишь как дополнение к основной медикаментозной терапии.

    источник

    Анализ ПЦР на гепатит С — это исследование, направленное на выявление возбудителя инфекции (HCV) и происходящее в режиме реального времени, обнаруживает генетический материал вируса и его нагрузку в крови. Линейный диапазон концентрации на аппликаторе должен быть равен 7,5х10 (2) — 1х10 (8) копий/мл образца. Молекулярно-биологический метод диагностирования помогает установить наличие и степень зараженности организма человека, а также схему дальнейшего лечения и ее эффективность.

    Читайте также:  Можно есть печень говяжью при похудении

    Важным моментом в гепатите С является его генотип, от которого зависит результативности лечения заболевания. HCV делится на шесть генотипов, которые разделятся на несколько субтипов. Согласно ВОЗ, генотип обозначается арабскими цифрами, а субтип — латинскими строчными буквами. Генотип 1 дает минимальную реакцию на лечение, не же ли другие. Генотип 4 встречается чаще всего в Восточной Африке, а генотип 5 — Южной Африке, а генотип 6 — в Юго-Восточной Азии. Поэтому генотип HCV считается самым важным фактором в определении эффективности лечения вируса.

    Нагрузка инфекции при гепатите С — не изученный аспект медицины, так как однозначного мнения на данную тему нет. Это отмечается тем, что по результатам исследования получаются неоднозначные результаты, по которым невозможно определить четкую связь между наличием РНК и белков ВГС в организме инфицированного. Для детального изучения применяется такой метод как “ОТ-ПЦР” (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией), “ПЦР in situ” и другие. Белки гепатита С выявляются благодаря поликлональной сыворотке или моноклональным антителам.

    Для изучения и анализа распределения РНК гепатита С применяют количественный и качественный анализ ОТ-ПЦР. Активность патологии в печени, приводящая к циррозу, оценивается по шкале реакции фермента АЛТ (аланинаминотрасферазы) и ИГА (индексу гистологической активности).

    Для того, чтобы выявить РНК нужно сдать HCV биохимический анализ крови, в котором определится наличие и доля вируса.

    Для самостоятельного изучения результатов анализа важно знать две вещи:

    1. Качественный анализ исследования крови отвечает на вопрос “присутствует ли РНК вируса?”
    2. Количественный — отвечает на вопрос “если да, то в каком количестве?”

    Если полученные данные подтверждают присутствие в организме РНК вируса, то необходимо каждые полгода проходить ПЦР исследование (HCV-РНК качественный).

    ПЦР наиболее чувствительный метод, который показывает низкую нагрузку в диапазоне до 800 000 МЕ/мл (8 х 10 (5) МЕ/мл) или высокую — свыше 800 000 МЕ/мл.

    Стоит отметить, что, если результат анализа показывает низкое значение РНК в крови, то у человека нет хронического гепатита С. Для того, чтобы убедиться, что в организме больше нет вируса, необходимо сдать повторные анализы на протяжении двух лет с помощью текст-систем.

    Важно помнить, что результаты разных лабораторий могут разниться, так как в каждом учреждении используются свои методы исследования, зависящие от способа забора и хранения крови. Поэтому лучше всего сдавать анализы в одном месте, чтобы был виден рост или падение вирусного заболевания.

    Тесты для выявления вируса “гепатит С” разделяются на два вида:

    • качественные, подтверждающие наличие хронической инфекции;
    • количественные, прогнозирующие результат лечения.

    Например, “Экспресс-тест на гепатит С” производит предварительный, но не точный (как в лаборатории) анализ крови. В такой набор входят: пипетка, стерильные салфетки, скарификатор, тест-кассета, буфер — растворитель. проводить данную манипуляцию нужно из подушечки пальца.

    Также в настоящее время особую популярность набирает иммунохроматографический тест, в котором лежат 1 или 25 тестовых полосок. Количество полосок зависит от цены медицинского устройства.

    Для того чтобы проверить работоспособность печени, врач может назначить печеночный тест (пробу), который покажет о наличии или отсутствии каких-либо повреждений печени, уровень общего белка, альбумина, билирубина, а также АЛТ и АСТ, маркеры гепатита С.

    Не стоит пренебрегать советам лечащего доктора, лучше сдать лишний анализ, чем потом мучиться и плакать о том, что какого-то показателя не хватило, а он был очень важен.

    Согласно мониторинговой статистике цен, анализы на выявление в организме вируса “гепатит С” стоят не малых денег. Например,определение РНК в плазме крови (HCV-RNA) стоит 9 800 рублей, качественный тест — 370 рублей, количественный — 1 290 рублей, забор крови — 500 рублей. Но в законодательстве предусмотрены квоты для больных инфекционными заболеваниями, но зачастую многие не дожидаются их и поэтому прибегают к платному лечению.

    Тест-полоски в настоящее время вещь хорошая, но относительно дорогая:

    • тест ВГС стоит в аптеке 220 рублей (1 полоска);
    • тест ВГС стоит в аптеке 2 750 рублей (25 полосок).

    Поэтому, если Вы узнали о том, что в Вашем организме поселился вирус, но у Вас нет денежных средств, все равно немедленно обратитесь к врачу, так как для диагностики заболевания необходимо пройти много анализов и обследований, а некоторые результаты которых получаются не сразу, а через несколько дней или недель. Не думайте о деньгах, обращайтесь за помощью к доктору, он поможет решить Вашу проблему.

    Пройдя комплексное обследование на гепатит С, Вы получили “положительный” результат, не расстраивайтесь, а лучше пройдите анализы повторно, так как может быть ложноположительный ответ на выявление инфекции. Причинами такого результата служат:

    • неисправная техника, на которой происходит тестирование био-материалов;
    • некачественные реактивы;
    • чувствительностью метода исследования;
    • неправильная подготовка пациента-больного к исследованию (например, инфицированный ел до проведения анализа).

    Согласно приказу Роспотребнадзора все результаты с пометкой “положительный” отправляются в ОРУИБ.

    После того, как повторный полученный результат окажется со знаком “+”, следует записать на прием к врачу-инфекционисту, разузнать о таком диагнозе как гепатит С. О методах и способах лечения гепатита с читайте здесь.. Далее необходимо установить генотип инфекционного заболевания, от которого зависит продолжительность курса лечения. Многие врачи также советуют на всякий случай проверить печень на наличие фиброза, цирроза или рака. После полученных результатов УЗИ, эластографии, биопсии и фибросканирования желательно обговорить со своим лечащим врачом о возможности лечиться бесплатно. Также у доктора важно уточнить о таких способах лечения как терапия софосбувиром, даклатосвиром, ледипасвиром.

    Главное ни в коем случае не заниматься самолечением и не прибегать без разрешения врача к народной медицине. Так как в борьбе с гепатитом С главное не упустить время и вовремя начать соответствующее и индивидуальное лечение.

    источник

    Любой человек, инфицированный вирусом гепатита C (ВГС), рано или поздно сталкивается с таким понятием как вирусная нагрузка (ВН) и с вопросом о его расшифровке. ВГС относится к сравнительно недавно открытым вирусам — до 80-х годов XX века он не идентифицировался как самостоятельная вирусная частица.

    Хотя ученые и замечали, что обнаруживаемый в крови больных гепатитом биоматериал не принадлежит ни к типу A, ни к типу B. С 90-х годов прошлого века стало возможным выявлять возбудитель гепатита C в анализе крови.

    Многозначные числа в показателях анализа нередко приводят пациентов в замешательство, ведь иногда в результатах можно увидеть цифры с шестью нолями. Что это такое, для чего определяется и что означает вирусная нагрузка при гепатите C, расшифровка которой вызывает столько вопросов?

    Показатель, называющийся вирусная нагрузка при гепатите С, измеряется для определения количества вирусных частиц, находящихся в крови пациента, инфицированного ВГС. Сами по себе вирусы в отличие от бактерий не являются полноценными микроорганизмами, которые могли бы размножаться вне клеток инфицированного организма. Они представляют собой участок, или отрезок, генетического материала, который при попадании в чужие клетки начинает эти клетки разрушать.

    Вирус гепатита C является ничем иным как цепочкой РНК (расшифровка — «рибонуклеиновая кислота»), покрытой белками и «запрограммированной» на поражение клеток печени.

    Наблюдение за параметром ВН позволяет эффективно контролировать хронические формы патологии, а при острых формах болезни — организовывать оптимальную тактику лечения.

    При положительном качественном тесте на наличие ВГС в крови (проще говоря, при обнаружении в крови РНК вируса) возникает необходимость в уточнении количественного показателя этого параметра, то есть, должна быть определена вирусная нагрузка.

    Гепатит C «отмечается» в крови высокой или низкой концентрацией генома вируса, в зависимости от чего и ВН имеет соответствующее название. Сегодня для определения ВН пользуются тремя видами лабораторных анализов.

    1. Метод ПЦР (расшифровка — «полимеразная цепная реакция») является наиболее чувствительным именно к ВГС, поэтому применяется чаще других методик для определения ВН.
    2. Еще один достаточно простой и недорогой метод — исследование разветвленной ДНК (расшифровка — «дезоксирибонуклеиновая кислота»), но его недостатком считается слабая чувствительность к низким концентрациям ВГС.
    3. Для тестирования ВН часто используют транскрипционную амплификацию, способную обнаружить в пробах крови следы нуклеиновых кислот.

    Для исследования забирается венозная кровь, поэтому для подготовки к анализу достаточно ничего не есть с утра и не курить хотя бы за полчаса до сдачи анализа.

    При обнаружении ВГС проводится несколько тестов количественного анализа, требующих расшифровки:

    • первоначальный, для назначения лечебных мероприятий;
    • повторный — через месяц после начала терапии;
    • через 3 месяца от начала терапии;
    • через 6 месяцев.

    Такие наблюдения дают возможность прогнозировать активность ВГС, предполагаемую скорость размножения вируса и вероятность ремиссий.

    Единицами измерения виремии (концентрации вируса в крови) при гепатите C в нашей стране до недавнего времени были т.н. вирусные копии на 1 мл крови.

    Однако во всем мире принято измерение вирусной нагрузки в МЕ/мл (расшифровка — «международные единицы» на миллилитр).

    Это имеет значение при сдаче анализов в разных медицинских учреждениях, ведь в некоторых лабораториях продолжают проводить исследования по старинке и указывать результаты в копиях.

    О чем же говорит расшифровка вирусной нагрузки при гепатите C?

    Под референсными, или нормальными, показателями ВН подразумевается безвирусная норма (или отрицательный качественный анализ). То есть в норме вирусы в крови не обнаруживаются, никакой дополнительной расшифровки не требуется.

    При уровне виремии, не превышающем 800 000 МЕ/мл, приблизительно равном 2 млн копий на мл, расшифровка показателя — низкая ВН. Низкая вирусная нагрузка при гепатите C имеет более благоприятные прогнозы для лечения и меньшую вирусологическую опасность в плане заражения ВГС окружающих людей.

    При уровне вирусемии, превышающем 8×10^5, расшифровка показателя — высокая ВН. Высокая вирусная нагрузка при гепатите C является поводом для увеличения планируемых сроков терапии, особенно если контрольные (повторные) тесты показывают медленное снижение количества вирусов в крови.

    Снижение ВН при гепатите C может носить как спонтанный, так и следственный характер (то есть являться результатом правильно подобранной терапевтической схемы).

    Но прежде чем приступить к терапии, необходимо не только установить концентрацию вирусов в крови, но и провести расшифровку генотипа вируса, проверить наличие противопоказаний к противовирусной терапии у пациента и другие факторы, которые могут стать препятствием для назначения определенных препаратов.

    Сегодня для лечения гепатита С применяются различные схемы. Наряду с современными ингибиторами вирусной протеазы и полимеразы (симепревир, софосбувир, ледипасвир, даклатасвир и другие) используются и традиционные подходы с применением интерферона и рибавирина. Хотя, нужно отметить, что последние и уходят в прошлое, как малоэффективные и имеющие большое количество побочных эффектов.

    Эффективность терапевтических схем зависит от различных факторов:

    • генотипа вируса;
    • возраста и пола пациента;
    • генотипа самого пациента;
    • давности инфицирования;
    • применения пациентом конкретных препаратов.

    О диагностике гепатита С и вирусной нагрузке расскажет врач-гастроэнтеролог в следующем видео:

    источник